Şevketibostan (cnicus benedictus) bitkisinden peroksidaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu

Abstract

Bu çalışmada, Peroksidaz (POD) enzimi Şevketibostan (Cnicus benedictus) bitkisinden saflaştırılmış ve kinetik özellikleri incelenmiştir. Öncelikle, POD enzimi üçlü-faz ayırma tekniği (TPP) ile saflaştırılmış ve SDS-PAGE yöntemiyle saflık kontrolü yapılmıştır. POD enziminin molekül ağırlığı 63 kDa olarak bulunmuştur. Enzimin kinetik karakterizasyon çalışmalarında, substrat spesifikliğini belirlemek için 4-metil katekol, H2O2, o-fenilendiamin, gallik asit, kafeik asit ve pirogallol substratları kullanılmıştır. Kullanılan tüm substratlar için Michaelis-Menten (Km) sabiti ve maksimum reaksiyon hızı (Vmax) değerleri hesaplanmıştır. Enziminin karakterizasyon çalışmalarında ayrıca optimum pH, optimum sıcaklık, optimum iyonik şiddeti, tuz toleransı ve enzimin depolanma kararlılığı incelenmiştir. Şevketibostan (Cnicus benedictus) POD enziminin optimum pH’sı 7,0 ve optimum sıcaklığı 30 oC olarak bulunmuştur. Şevketibostan POD enzimini askorbik asit, sodyum azid (NaN3), Fe+3, Fe+2, Hg+2, Sn+2, Pb+2, Cd+2, Cu+2, K+, Na+, Ca+ metalleri, DMSO, DMF, etanol, aseton ve t-butanol organik çözücüleri inhibe etmektedir.

In this study, Peroxidase (POD) enzyme was purified from Şevketibostan (Cnicus benedictus) and its kinetic properties were investigated. First, POD enzyme was purified by the triple-phase separation technique (TPP) and its purity was checked by SDS-PAGE method. The molecular weight of the POD enzyme was found to be 63 kDa. In the kinetic characterization studies of the enzyme, 4-methyl catechol, H2O2, o-phenylene diamine, gallic acid, caffeic acid and pyrogallol substrates were used to determine the substrate specificity. Michaelis-Menten (Km) constant and maximum reaction rate (Vmax) values were calculated for all substrates used. In the characterization studies of the enzyme, optimum pH, optimum temperature, optimum ionic strength, salt tolerance and storage stability of the enzyme were investigated. POD enzyme from Sevketibostan (Cnicus benedictus) was found to have an optimum pH of 7.0 and an optimum temperature of 30 oC. Sevketibostan POD enzyme ascorbic acid, sodium azide (NaN3), Fe + 3, Fe + 2, Hg + 2, Sn + 2, Pb + 2, Cd + 2, Cu + 2, K +, Na +, Ca + metals, DMSO, DMF inhibits ethanol, acetone and t-butanol organic solvents