Çağla badem (Prunus Dulcis) bitkisinden polifenol oksidaz enziminin saflaştırılması ve karekterizasyonu

Abstract

Polifenol oksidaz (PPO) enzimi badem çağladan (Prunus dulcis) ekstrakte edilmiş ve amonyum sülfatla çöktürme, diyaliz, jel filtrasyon kromotografisi yöntemleri ile saflaştırılmıştır. Amonyum sülfat çöktürme ve diyaliz işlemlerinden elde edilen örnek, PPO enziminin karakterizasyonu için kullanılmıştır. Bu amaçla, optimum pH ve sıcaklık değerleri farklı substrat kullanılarak belirlenmiştir. PPO enziminin en iyi substratın 4-metil katekol olduğu bulunmuştur. Bu subtrat için optimum pH ve sıcaklık değerleri sırasıyla 6,5 ve 35 oC olarak belirlenmiştir. Km ve Vmax değerleri 1,71 mM ve 99,0 ?A dak-1 olarak bulunmuştur. Bu çalışmada yedi adet inhibitör ile çalışılmış ve etkili olanların yarışmalı inhibitör olarak sodyum azid, benzoik asit, sitrik asit, L-askorbik asit ve tiyoüre olduğu bulunmuştur. Metallerin PPO enzim aktivitesi üzerine etkisi incelenmiş Fe+3, Cu+2, Mn+4, Pb+2 metallerinin enzim aktivitesini artırırken Zn+2, Mg+2, Ba+2, Ca+2, Co+3, Sn+2, K+1 metallerinin enzim aktivitesini azalttığı bulunmuştur.

Polyphenol oxidase (PPO) of unripe almond (Prunus dulcis) fruit was extracted and purified through (NH4)2SO4 precipitation, dialysis, gel filtration. The sample obtained from ammonium sulfate precipitation and dialysis was used for characterization of the PPO. For this aim, optimum conditions, i.e. pH, temperature were determined with different with substrates. The best substrate of the PPO was found to be 4-methyl catechol. Optimum pH and temperature were found 6,5 and 35oC for this substrate. Km and Vmax values were 1,71 mM and 99,0 ?A dak-1 with 4-methyl catechol, respectively. Seven inhibitors were tested in the study and the effectives were found to be sodium azide, benzoic acid, citric acid, L-ascorbic acid and tiourea as competitive inhibitors. The enzyme activity was also tested against some metals. Fe+3, Cu+2, Mn+4, and Pb+2 ions act as enzyme activator however Mg+2, Ba+2, Ca+2, Co+3, Sn+2, K+1 and Sn+2, metals act as enzyme inhibitors.